Functional polymorphisms of DNA repair genes in Latin America reinforces the heterogeneity of Myelodysplastic Syndrome

Abstract Nucleotide excision repair pathway (NER) is an essential mechanism for single-strand breaks (SSB) repair while xeroderma pigmentosum family (XPA to XPG) is the most important system to NER. Myelodysplastic syndrome (MDS) is a heterogeneous hematological cancer characterized by cytopenias and risk of acute myeloid leukemia (AML) transformation. MDS pathogenesis has been associated with problems of DNA repair system. This report aimed to evaluate NER polymorphisms (XPA rs1800975, XPC rs2228000, XPD rs1799793 and XPF rs1800067) in 269 MDS patients of different populations in Latin America (173 Brazilian and 96 Argentinean). Genotypes were identified in DNA samples by RT-qPCR using TaqMan SNP Genotyping Assay. Regarding rs1799793 polymorphism of XPD for Brazilian population, the heterozygous genotype AG presented a high odds ratio (OR) to have a normal karyotype (p= 0.012, OR=3.000) and the mutant homozygous genotype AA was associated to a high OR of AML transformation (p= 0.034, OR=7.4). In Argentine population, the homozygous mutant AA genotype of rs1800975 polymorphism of XPA was associated with an increased odd to have hemoglobin levels below 8g/dL (p= 0.013, OR=10.000) while for the rs1799793 polymorphism of XPD, the heterozygous AG genotype decreased OR to be classified as good (p< 0.001, OR=9.05 × 10−10), and intermediate (p< 0.001, OR=3.08 × 10−10), according to Revised-International Prognostic Scoring System. Regarding the rs1800067 polymorphisms of XPF, the homozygous mutant AA genotype showed a decreased OR to be classified as good (p< 0.001, OR=4.03 × 10−13) and intermediate (p< 0.001, OR=2.54 × 10−13). Our report reinforces the heterogeneity of MDS and demonstrates the importance of ethnic differences and regional influences in pathogenesis and prognosis of MDS.

Recomendaciones metodológicas para el monitoreo molecular BCR-ABL1 en pacientes con leucemia mieloide crónica por pcr cuantitativa en tiempo real / Guidelines for molecular monitoring of BCR-ABL1 in chronic myeloid leukemia patients by RT-qPCR

Actualmente las guías clínicas para el manejo de pacientes con leucemia mieloide crónica incluyen el monitoreo molecular de BCR-ABL1 por PCR cuantitativa en tiempo real; esta metodología permite definir la respuesta molecular. A pesar de la probada importancia pronóstica de la respuesta molecular, en muchos casos no se tiene en cuenta que la PCR cuantitativa puede producir datos muy variables, que pueden afectar la validez de los resultados, y hacer difícil la comparación entre diferentes laboratorios. Por lo tanto, para un manejo clínico óptimo, es absolutamente necesaria la estandarización de las metodologías de medición de BCR-ABL1. La estrategia para obtener valores de BCR-ABL1 comparables consiste en la adopción de la escala internacional. La conversión a la escala internacional se logra mediante la aplicación de un factor de conversión específico para cada laboratorio; este factor de conversión se puede obtener mediante el uso de calibradores secundarios validados, que hoy se producen en Argentina, en el marco del programa nacional de armonización. Por otra parte, con el objetivo de mitigar las diferencias entre laboratorios y facilitar criterios uniformes en la interpretación de los resultados y presentación de los informes, decidimos preparar estas guías de laboratorio. Esto permitirá además a los laboratorios poder evaluar su calidad de trabajo, tarea muy importante, en particular para aquellos centros más aislados, que no tienen fácil acceso a costosos kits comerciales o programas internacionales de intercambio de muestras.

Current clinical guidelines for managing chronic myeloid leukemia include molecular monitoring of BCR-ABL1 transcript quantitative reverse-transcription PCR. Despite the proven prognostic significance of molecular response, it is not widely appreciated that quantitative reverse-transcription PCR potentially produces highly variable data, which may affect the validity of results, making comparability between different laboratories difficult. Therefore, standardized reporting of BCR-ABL1 measurements is needed for optimal clinical management. An approach to achieve comparable BCR-ABL1 values is the use of an international reporting scale. Conversion to the international scale is achieved by the application of laboratory specific conversion factor that is obtained by using validated secondary reference calibrators. Moreover, with the aim to mitigate the interlaboratory imprecision of quantitative BCR-ABL1 measurements and to facilitate local laboratory results interpretation and reporting, we decide to prepare laboratory guidelines that will further facilitate interlaboratory comparative studies and independent quality-assessment programs, which are of paramount importance for worldwide standardization of BCR-ABL1 monitoring results, in particular for those most isolated laboratories, with not easy access to commercial kits or sample interchange programs.

GEN MDR-1 y resistencia al imatinib en células K562 / MDR-1 gene and resistance to imatinib in K562 cells

El tratamiento de la Leucemia Mieloide Crónica (LMC) con Imatinib puede fracasar por mutaciones en el dominio tirosina quinasa o amplificación del gen BCR/ABL. Otros mecanismos de refractariedad pueden deberse a los genes de resistencia múltiple a drogas (MDR). Objetivo: Investigar en la línea celular K562 (LMC resistente al Imatinib), la expresión del gen MDRl y los efectos de su inhibición con Ciclosporina A (CyA). Métodos: Se sintetizó ADNc por retrotranscripción del ARN total y se amplificaron por RT-PCR los genes BCR/ABL y MDRl con primers específicos. Se verificó la expresión de la glicoproteína P-gp (producto del gen MDRl) por inmunohistoquímica con 2 anticuerpos monoclonales (C494 y C2l9). Las células K562 fueron enfrentadas (24hs) con Imatinib (2uM), CyA (3ug/ml), Imatinib+Cy A. Se evaluaron apoptosis con naranja de acridina/bromuro de etidio (microscopía de fluorescencia) y función farmacorresistente de P-gp con Rhodamina-l23 (citometría de flujo). Resultados: La expresión del gen MDRl se confirmó tanto por RT-PCRcomo por inmunhistoquímica. La prueba funcional con Rhodamina-l23 indicó que la P-gp fue inhibida por CyA o hipotermia. El tratamiento con Imatinib+Cy A triplicó el porcentaje de apoptosis comparado con Imatinib solo. Conclusión: El gen MDRl jugaría un rol adicional en la resistencia al Imatinib. La Cy A u otros inhibido res de la P-gp, facilitaría la acción del Imatinib, induciendo mayor porcentaje de apoptosis en células BCR/ ABL positivas.

Leucemia mieloide crónica: mecanismos genéticos de resistencia al mesilato de Imatinib (STI571) / Chronic myeloid leukemia genetic mechanisms of Imatinib resistance

La resistencia al tratamiento con Imatinib resulta de mecanismos dependientes del BCR/ABL tales como la sobreexpresión y la adquisición de mutaciones de punto en sitios críticos del dominio kinasa de ABL o de diferentes mecanismos independientes, como la evolución clonal. El propósito de este estudio fue identificar las mutaciones del dominio kinasa del gen ABL y la amplificación del reordenamiento genómico BCR/ABL en pacientes con LMC con falta o pérdida de respuesta hematológica y/o citogenética al tratamiento con Imatinib. Se incluyeron 71 pacientes, de los cuales 56 fueron evaluables. En trece pacientes (24 por ciento) se identificó algún mecanismo de resistencia: 10 (18 por ciento) presentaron mutaciones de punto en el dominio kinasa, 3 (5 por ciento) duplicación del cromosoma Ph' y sólo 1 (1 por ciento) mostró amplificación del BCR/ABL. La mutación T315I se observó en 1 caso. La mediana de edad fue significativamente menor [39 años (20-53)] en los pacientes en los que se encontraron mutaciones que en los casos sin ellas [51 años (24-75)] p=0.047. Se detectaron mutaciones en 1 de 29 (3 por ciento) pacientes en fase crónica, 8 de 20 (40 por ciento) pacientes en fase acelerada y en 1 de 8 (12 por ciento) pacientes en crisis blástica (p=0.001). La mediana de aparición de las mismas fue de 45 meses desde el diagnóstico de LMC (12-158) y 28.5 meses (1-56) desde el inicio de la terapia con Imatinib (p=0.591 y p=0.762 respectivamente). Las mutaciones en la región p-loop fueron las más frecuentes. El análisis univariado demostró que edad y fase de la enfermedad se asociaron significativamente con presencia de mutaciones. Las mutaciones en el dominio kinasa se reconocen como el principal mecanismo de resistencia al tratamiento con Imatinib y su detección puede determinar un cambio en la estrategia terapéutica.

Daño al ADN asociado al contenido de arsénico urinario en una población de jóvenes expuesta al arsénico por el agua de bebida / DNA damage associated to urinary arsenic content in a children population exposed to arsenic by drinking water

El arsénico es un contaminante ampliamente distribuido en el mundo. En Argentina se estima que cerca de un millón y medio de personas están expuestas a sus efectos deletéreos por ingesta de agua con altos tenores de este metaloide. El presente trabajotuvo como objetivo establecer si existe correlación entre la exposición a arsénico inorgánico (AsI) a través del consumo de aguas y el nivel de daño al ADN. Muestras de orina y sangre fueron recolectadas de una población de la provincia de Santiago del Estero. Sobre éstas se evaluó el contenido de arsénico urinario (Asu) como marcador de exposición reciente y el daño producidoal ADN mediante el ensayo de electroforesis de células únicas (test del cometa) en sangre como índice de genotoxicidad. De la población total estudiada (n=65), el 41,54% fueron niños. El 57% de la población infantil presentó valores de Asu superiores al valor máximo referencial (hasta 40μgAs/g creatinina) en un rango comprendido entre 41,78 y 3918,10 μgAs/g creatinina. La evaluación genotóxica en sangre reveló que los niños expuestos a elevados niveles de arsénico presentaron un porcentajede células con alto daño al ADN significativamente mayor al compararlo con aquellos con Asu menor al valor de referencia (32,79% ± 3,32 vs 9,77% ± 6,59; p<0,001). A pesar del bajo número de muestras analizadas en este estudio preliminar, existe una buena correlación entre el contenido de arsénico urinario en la población general y el daño al ADN (r=0,6509; p=0,0117). Los resultados obtenidos muestran que la población estudiada expuesta a altos niveles de arsénico, representa un grupo de riesgo para el desarrollo de patologías relacionadas con este tóxico.

Arsenic is an environmental pollutantwidely distributed in the world. In Argentine about a million and a half of inhabitants are exposed to its deleterious effect by drinking water with high levels of this metalloid. In this work the correlation between the exposure to inorganic arsenic and thelevel of DNA damage in blood cells was assessed. Urine and blood samples were taken from a population of Santiago del Estero province. Urinary total arsenic (Asu) content (a recent exposure biomarker) and single cell gel electrophoresis (Comet assay) wereperformed. Children represented the 41.54% of the sampled population (n=65) and 57% of them had Asu levels between 41.78 and 3918.10 μgAs/g creatinine (reference value: less than 40μgAs/g creatinine). Comet assay showed that children with high levelof Asu presented a percentage of cells with high DNA damage increased respect to those with Asu below the reference value (32.79% ± 3.32 vs 9.77% ± 6.59, p< 0.001). Despite the small number of samples analyzed in this preliminary study, there is a clear tendency of correlation between total arsenic content in urine and DNA damage (r=0.6509, p=0.0117). The data obtained showed that the children population exposed to high levels of arsenic represent a group of risk for developing pathologies related with this toxic.

Genética de la hemofilia humana. Diagnóstico molecular de defectos en los genes de los factores VIII y IX de coagulación / Genetics of human haemophilia. Molecular diagnosis of defects affecting coagulation factors VIII and IX

La hemofilia A (HA) y B (HB) son enfermedades hemorrágicas hereditarias ligadas al sexo causadas por defectos de los factores VIII y IX, respectivamente. Excepto grandes inversiones recurrentes involucradas en la mitad de las HA severas, el resto de las hemofilias son causadas por distintos tipos de mutaciones grandes y pequeñas. Fueron estudiadas 70 familias con HA severa (se), 6 con seHB, 1 con HA moderada-leve (m) y 2 con mHB. Primero, en seHA, se estudio la inversión del intrón 22 (Inv22) usando un nuevo abordaje basado en PCR inversa. En los casos negativos para las inversiones se estudiaron primariamente las grandes deleciones y secundariamente las mutaciones pequeñas. En familias con HA, encontramos la Inv22 en 43 por ciento de las seHAs, una única inversión del intrón 1, 10 grandes deleciones (catorce por ciento)y 23 mutaciones pequeñas (incluyendo 10 deleciones, 3 inserciones, 4 cambios nonsense, 5 missense y 1 de splicing); y en HB, 1 deleción afectando un sitio de splicing, 4 missense y 3 nonsense. Este esquema de caracterización de mutaciones permite un estudio y análisis molecular preciso de HA y HB y beneficiará tanto al asesoramiento genético como a la provisión de información clave para el diseño del tratamiento.

Detección de grupos de riesgo en síndromes mielodisplásicos. Un estudio multicéntrico / Detection of risk groups in myelodisplastic syndromes. A multicentric study

Los síndromes mielodisplásicos (SMD) comprenden un grupo heterogéneo de desordenes hematólogicos con riesgo de evolución a leucemia mieloide aguda (LMA). El Grupo Franco-Americano-Británico (FAB) los clasifica en cinco entidades morfológicas y el Sistema Pronóstico Internacional (IPSS) propone cuatro grupos de riesgo basándose en variables clínicas y citogenéticas. El objetivo del trabajo fue evaluar la aplicación del IPSS en población Argentina, analizar el valor pronóstico de sus variables y determinar si dicho sistema permite identificar subgrupos pronósticos de riesgo dentro de los subtipos FAB. Se evaluaron 234 pacientes con SMD de novo (Media de seguimiento: 28 meses), con el fin de determinar sobrevida (SV) y sobrevida libre de LMA (SLL). Se analizaron la clasificación FAB y el IPSS, así como sus variables (número de citopenias, porcentaje de blastos, grupos de riesgo citogenético). Los resultados mostraron diferencias significativas para SV y SLL. La aplicación del IPSS permitió la diferenciación de los cuatro grupos de riesgo y ayudó a identificar subclases pronósticas dentro de los subtipos FAB: 5 , 15 y 19 por ciento de pacientes con peor pronóstico dentro de los subtipos Anemia Refractaria (AR), AR con sideroblastos en anillo (ARSA) y AR con exceso de blastos (AREB), respectivamente. El IPSS no fue informativo para el subtipo AREB en transformación, ni tampoco en pacientes con leucemia mielomonocítica crónica.

El estudio citogénito como variable pronóstica en los síndromes mielodisplásicos / cytogenetic study as prognostic factor in myelodysplastic disorders

Los Síndromes Mielodisplásicos (SMD) comprenden un grupo heterogéneo de desórdenes hematológicos con riesgo de evolución leucémica. En este trabajo se evaluó el valor pronóstico del cariotipo al momento del diagnóstico, teniendo en cuenta el International Prognostic Scoring System (IPSS). Dicho puntaje propone 3 grupos pronósticos para la variable citogenética: Bueno (cariotipo normal, del(5q), del(20q) o -Y), Intermedio (+8 y misceláneas) y Malo (-7/del(7q) o alteraciones complejas). En este estudio se evaluaron 198 pacientes (95 AR, 13 AS, 43 AREB, 23 AREBt y 24 LMMC) distribuidos, de acuerdo al IPSS en: 60 Bajo riesgo, 76 Intermedio 1, 32 Intermedio 2 y 30 Alto riesgo (media de seguimiento: 28 meses). Los resultados citogenéticos de médula ósea se agruparon en: 126 Bueno, 41 Intermedio y 31 Malo, con una mediana de Sobrevida de 60, 34 y 28 meses (p=0.013) y una Evolución Leucémica (25porciento) de 46, 19 y 5 meses (p<0.001), respectivamente. El cruzamiento entre los grupos citogenéticos y el IPSS mostró que el 84 porciento de los pacientes pertenecientes al grupo citogenético Bueno correspondían al riesgo Bajo e Intermedio-l, el 61 porciento del grupo citogenético Intermedio presentaban riesgo Intermedio-l; mientras que, el 84 porciento perteneciente al grupo citogenético Malo pertenecían a los grupos de riesgo Intermedio-2 y Alto. Estos datos muestran una importante asociación (p<0.001) entre el estudio citogenético y los grupos de riesgo determinados por el IPSS. Lo cual indica la importancia del cariotipo, aparte del porcentaje de blastos y las citopenias, para individualizar grupos pronósticos en los SMD.

Leucemia mieloide crónica: evaluación de los resultados del tratamiento con interferón alfa / Chronic myeloid leukemia: evaluation of the results of the treatment with interferon alpha

El pronóstico de la leucemia mieloide crónica (LMC) mejoró substancialmente con el tratamiento con Interferón alfa (IFNalfa) y los mejores resultados estarían relacionados a la respuesta genética (RG). Para evaluar tal presunción, se compararon los resultados terapéuticos obtenidos en 30 pacientes con LMC Ph+ en primera fase crónica, tratados con IFN alfa 5 MU/M²/d (Grupo 1) con los resultados obtenidos en 31 pacientes pertenecientes a un protocolo previo basado en IFN alfa 3 MU 3/v/sem., más 6-mercapto purina 150mg/d/v.o. y citarabina 150 mg/d/sc por cuatro días por mes (Grupo 2). El Grupo 1 tuvo mejores respuestas hematológicas completas (80 por ciento) y RG (76 por ciento) que el Grupo 2 (29 por ciento y 17 por ciento respectivamente) (p < 0.001). La duración de la fase crónica fue más larga en el Grupo 1, 43 meses contra 18 meses en el Grupo 2 (p < 0.001). Además, la probabilidad de sobrevida a 5 años (SV) fue mejor en el Grupo 1, 62 por ciento contra 15 por ciento en el Grupo 2 (p < 0.001). En nuestra experiencia, 5 MU/M²/d de IFN alfa prolongó la SV y la duración de la fase crónica, independientemente de la RG, sugiriendo que los beneficios del IFN alfa podrían relacionarse a otros mecanismos de acción, además de la supresión del cromosoma Ph.

Los oligonucleotidos antisense potencian la apoptosis inducida por la idarubicina en la linea celular K-562 / Antisense oligonucleotides increase the apoptotic effect of idarubicin in K-562 cell line

La línea celular K-562, portadora del rearreglo bcr/abl de tipo b3a2 es resistente a la apoptosis inducida por inhibidores de topoisomerasa II. Se trataron células de dicha línea con complejos de liposomas catiónicos (DMRIE-DOPE y Dcchol-DOPE) y oligonucleótidos antisense (ODNs AS) dirigidos contra el ARNm bcr/abl de tipo b3a2, y non sense (ODNs NS), en una razón 3:1 lípido/ADN, durante 72 horas, luego se incubaron durante 24 horas con idarubicina (IDA), 0.5 mug/ml, para inducir apoptosis. La misma se evaluó por observación morfológica al microscopio de fluorescencia. Las células tratadas con los conjugados DMRIE-DOPE y Dcchol/DOPE con el ODN AS específico mostraron un mayor porcentaje de apoptosis inducida por IDA (X + DS: 14.74 + 2.07 y 20.43 + 4.58, respectivamente) comparadas con los controles no tratados con ODNs (X + DS: 8.08 + 0.82); (p<0.005). Los datos indican que los ODNs-AS dirigidos contra el ARNm bcr-abl de tipo b3a2 vuelven a las células de la línea K-562 sensibles a la IDA a la concentración mencionada.

Síndrome mielodisplásico: evaluación de la proteína p53 como factor pronóstico / Myelodysplastic syndrome: evaluation of p53 prognostic factor

Los síndromes mielodisplásicos representan un estado preleucémico en el cual existe una falla de los progenitores hematopoyéticos para diferenciarse normalmente. Se ha observado que estos cuadros clínicos obedecen a un desorden clonal y que el incremento de células blásticas en la médula ósea se correlaciona con un pobre pronóstico. Si bien no se conocen completamente los mecanismos moleculares que subyacen a esta progresión, se han detectado diversas anomalías cromosómicas y mutaciones genéticas. La proteína p53 es el producto de un gen supresor de tumor relacionado con los mecanismos de control de la división celular y en el desarrollo de neoplasias. Para determinar si p53 tiene participación en el proceso mielodisplásico, evaluamos en este estudio las alteraciones de la proteína p53 y de su gen, empleando inmunohistoquímica y polimorfismo conformacional de cadena simple (SSCP) en un grupo de 21 pacientes con mielodisplasia, relacionando los hallazgos con la transformación leucémica, en un seguimiento a 5 años. Se encontraron alteraciones de la proteína en 4/21 casos (19 por ciento) y mutaciones del gen que la codifica también en 4/21 pacientes (19 por ciento). Seis pacientes (sobre 17 evaluables) desarrollaron leucemia aguda. El 50 por ciento de ellos presentó alteraciones de la proteína p53...

Expresión de sitios frágiles en neoplasias mieloides / Fragile site expression in myeloid leukemias

El objetivo del presente trabajo fue evaluar la expresión de sitios frágiles (SF) en pacientes con leucemia mieloide crónica (LMC) y leucemia mieloblástica aguda (LMA) a fin de establecer si expresan SF constitucionales en los mismos puntos de ruptura de las alteraciones cromosómicas presentes en el tejido neoplásico. Se estudiaron 9 pacientes con LMA, 7 con LMC y 7 individuos sanos. Se determinó el cariotipo en médula ósea y se indujo la expresión de SF con FUDR (10 µg/ml) y BUDR (50 µg/ml) en sangre periférica. El estudio citogenético de médula ósea demostró que todos los casos de LMC presentaron la t(9;22)(q34;q11). En LMA se encontraron 4 individuos con cariotipo normal y los restantes presentaron las siguientes alteraciones clonales: t(3;8)(q11;q13), del (5)(p11), t(3;11)(q21;p15), inv(16)(p13;q22), t(9;22) y del (9q). En los pacientes con LMC no se encontraron SF en las bandas 9q34 ó 22q11, involucradas en el cromosoma Phû. Tampoco se identificaron SF en los puntos de ruptura implicados en AC estructurales de los pacientes con LMA. Estos resultados sugerirían que los SF no estarían involucrados con el origen de los marcadores cromosómicos hallados en estas neoplasias.

Evaluación del clon neoplásico en síndromes mielodisplásicos mediante hibridización in-situ / Fluorescence in situ hybridization to evaluate the neoplastic clon in myelodysplastic syndromes

La trisomía 8 es una de las alteraciones citogenéticas más frecuentes en neoplasias hematológicas y se asocia principalmente a los desórdenes mieloides. En este trabajo evaluamos la trisomía 8 en 20 pacientes con mielodisplasias mediante las técnicas de Bandeo G y de hibridización in situ por fluorescencia (FISH). Ambas metodologías se realizaron a partir de un cultivo a corto plazo de médula ósea. En base al estudio citogenético clasificamos a los pacientes en dos grupos: a) pacientes con trisomía 8 (6/20) y b) pacientes sin trisomía 8 (14/20). Mediante FISH, el porcentaje de pacientes con trisomía 8 se duplicó debido a que esta metodología no sólo confirmó la presencia de esta alteración en aquellos pacientes donde fue previamente identificado por Bandeo G, sino también en 3 casos con cariotipo normal, 1 caso sin células en división y 2 casos con alteraciones estructurales. Nuestros resultados demuestran que esta metodología posibilita la detección de clones presentes en baja proporción así como también estimar la real incidencia del clon neoplásico independientemente del ciclo celular de la célula tumoral.

Genetica molecular de la hemofilia A / Molecular genetics of hemophilia A

Desde el aislamiento del gen del factor VIII (FVIII) de coagulación, se ha elucidado una gran variedad de mutaciones causales de la hemofilia A (HemA). La imposibilidad de monitorear todas estas mutaciones, hace que en el laboratorio sólo debamos abocarnos a aquellas más prevalentes. Este es el caso de la inversión del intrón 22 sólo detectada por tecnicas de biología molecular, que constituye la causa del 50 por ciento de las HemA severas. En este artículo, se discuten las ventajas e inconvenientes del uso diagnostico de polimorfismos genéticos ligados y se refieren los aspectos moleculares de la enfermedad, tanto de la proteína como del gen del FVIII. Finalmente, se analizan las prospectivas futuras que están ofreciendo las nuevas tecnologías. La ingeniería genética aporta actualmente, dos tipos de estrategias terapéuticas en hemofilia: el uso de factores de coagulación de origen recombinante, que evita los riesgos de infección grave que introducen los concentrados plasmáticos y la terapia génica, que aunque muy promisoria, aún se encuentra en etapa pre-clínica de experimentación.

Estudios citogenéticos y citomoleculares en mielodisplasias y leucemias agudas no linfoblásticas / Cytogenetic and cytomolecular studies in myelodisplastic syndromes and acute non-lymphoblastic leukemias

La asociación entre reordenamientos genómicos específicos y la etiopatogenia de las neoplasias pone de manifiesto el importante rol de la citogenética para el diagnóstico y pronóstico de estas enfermedades. El cultivo a corto plazo de muestras de punción aspiración de médula ósea de pacientes con diagnóstico de síndromes mielodisplásicos (SMD) y leucemia aguda no linfoblástica (LANL) permitió la obtención de extendidos los cuales fueron procesados con técnicas de bandeo G e hibridización in situ por fluorescencia (FISH). A través del estudio citogenético se detectaron las siguientes alteraciones estructurales: t(8;21), t(15;17) y la del (7q), asociadas las dos primeras a LANL subtipo FAB M2 y M3 respectivamente, mientras que en SMD se observaron la del (5q), del (7q) y del (12P). Para ambas patologías la alteración numérica más frecuente fue la trisomía 8. Con la metodología FISH confirmamos y caracterizamos marcadores citogenéticos imposibles de determinar con técnicas de bandeo cromosómico

Participacion de los sitios fragiles en cancer / Participation of fragile sites in cancer

La mayor parte de las neoplasias hematológicas y tumores sólidos presentan anomalfas cromosómicas especfficas, numéricas e estructurales, que podrían originarse debido a la existencia de ciertas zonas lábiles en el genoma, denominadas sitios frágiles (SF). Estos sitios se pueden definir como puntos específicos de los cromosomas con mayor susceptibilidad a rupturas y reordenamientos cromosómicos en las células somáticas levando a la activación de oncogenes o a la inactivación de genes supresores de tumor o antioncogenes, iniciando los primeros pasos del proceso oncogénico. En este trabajo se explica la calsificación y los mecanismos de inducción y se discute el significado biológico de estos sitios, principalmente su vinculación con el câncer.

Seguimiento citomolecular en pacientes con trasplante de médula ósea / Citomolecular studies in patients with bone marrow transplantation

El TMO se ha visto incrementado en forma significativa como terapia en anemias aplásicas (AA), en leucemias mieloblásticas agudas (LMA), leucemias linfoblásticas agudas (LLA), leucemias mieloides crónicas (LMC) y en algunas inmunodeficiencias congénitas. Con el propósito de caracterizar las células que están repoblando la médula ósea se realizaron estudios citogenéticos combinados con análisis moleculares en 26 pacientes cuyo diagnóstico fue: 16 LMC, 2 LMA, I LLA, 4 AF, I ß-Talasemia y 2 AA. La utilización de la sonda completa del cromosoma Y permitió el estudio mediante hibridización in-situ por fluorescencia (FISH) en aquellos pacientes con donante del sexo opuesto. En los casos donde donante y receptor poseen el mismo sexo se realizaron análisis moleculares de Fingerprint de ADN (FGP) lo cual posibilitó la caracterización de cada individuo. Este trabajo presenta el seguimiento de un grupo de 26 pacientes con transplante de médula ósea a los cuales se les realizó el estudio por citogenético con Bandeo G, FISH o Fingerprint de ADN. Nuestros resultados indican que 46 por ciento (12/26) presentó remisión clínica y genética, 19 por ciento (5/26) remisión clínica con enfermedad residual, 8 por ciento (2/26) recaída clínica y genética y 27 por ciento falleció. Estos estudios muestran que si bien 17 pacientes lograron la remisión clínica solamente el 71 por ciento de ellos se encuentra en remisión genética, mientras que el 29 por ciento mantuvo enfermedad residual.

Evaluación citomolecular y hematológica de la leucemia mieloide crónica / Chronic myeloid leukemia: citogenetic, molecular and hematological evaluation

La leucemia mieloide crónica (LMC) es un desorden mieloproliferativo clonal de la stem cell pluripotente, que origina elementos mieloides, eritroides, megacariocíticos y linfoides (B). La enfermedad se caracteriza por la presencia de una translocación recíproca entre los cromosomas 9 y 22, t(9;22) (q34;q11) la cual determina la formación de dos cromosomas marcadores el 22q ó cromosoma Philadelphia (Ph) y el 9q+. En las LMC Ph positiva el punto de ruptura dentro del BCR en el cromosoma 22 puede ocurrir en la región 3' ó 5' dependiendo si la unión se produce entre el exon 3 ó 2 del gen BCR con el exon 2 del gen ABL. Se originan de este modo dos diferentes configuraciones exónicas b3a2 y b2a2 que dan origen a dos RNA mensajeros que difieren en 75 pares de bases. Los tratamientos con Ó-interferon recombinante (ÓIFN) sólo o en combinación con quimioterapia intensiva han demostrado respuesta hematológica en un rango de 70 - 80 por ciento de los casos y respuesta citogenética en un rango 40 - 60 por ciento. En nuestra experiencia en el tratamiento con Ó-IFN, 6-mercatopurina y Ara-C en un grupo de 40 pacientes con LMC en fase crónica, mostró que el 80 por ciento presentaba respuesta hematológica mientras que sólo un 20 por ciento presentaba respuesta citogenética parcial o completa después de tres años de seguimiento. El 15 por ciento de los casos mostró una respuesta cariotipica (RC) menor, el 2,5 por ciento una RC mayor y 2,5 por ciento restante una RC completa. Cuando se correlacionó RC con el punto de ruptura del BCR se observó que el 75 por ciento de los casos que habían tenido algún tipo de RC presentaban el punto de ruptura en la región 5'BCR, lo cual haría suponer que las rupturas en 5' serían de mejor pronóstico.

Genotoxicidad in vitro de la azidotimidina (AZT) / Genotoxic activity of azidothymidine (AZT) in vitro

La azidotimidina (AZT) es la primera droga antirretrovira permitida para el tratamiento de la infección con el virus de la inmunodeficiencia humana. En esta investigación se evaluó la actividad genotóxica de la AZT en dos sistemas celulares en cultivo. En linfocitos humanos, la AZT produjo un aumento estadísticamente significativo en las roturas cromosómicas a la dosis de 100 µg/ml y en las células mixonucleadas a la dosis más alta utilizada (500 µg/ml). El intercambio de cromátidas hermanas (ICH) experimentó un significativo incremento a partir de 50 µg/ml. La proliferación celular de los linfocitos mostró un importante enlentecimiento a la concentración de 500 µg/ml. En la Línea de ovario de hamster chino (CHO), AZT produjo un significativo aumento en las aberraciones cromosómicas y en el ICH a las dosis de 1000 y 500 µg/ml, respectivamente. A la concentración de 2500 µg/ml se observó una demora en la progresión celular. Estos resultados sugieren que la droga AZT daña al ADN en los dos sistemas celulares estudiados, siendo los linfocitos humanos más sensibles que la línea CHO. Teniendo en cuenta este efecto genotóxico la droga AZT debe ser administrada con precaución a las poblaciones en riesgo